"mrazov\u00E1 fixace"@cs . . . . "65860"^^ . "Mrazov\u00E1 fixace, t\u00E9\u017E kryofixace je proces, jeho\u017E c\u00EDlem je dos\u00E1hnout vitrifikovan\u00E9ho stavu vzorku (\u201Ezesklen\u011Bn\u00ED\u201C), kdy je prepar\u00E1t ochlazen pod rekrystaliza\u010Dn\u00ED teplotu bez vzniku krystal\u016F. Z\u00E1kladn\u00EDm podm\u00EDnkou pro minimalizaci \u0161kod p\u0159i mrazen\u00ED prepar\u00E1tu je dosa\u017Een\u00ED vysok\u00E9 chladic\u00ED rychlosti. Oproti chemick\u00E9 fixaci m\u00E1 mrazov\u00E1 fixace n\u011Bkolik nesporn\u00FDch v\u00FDhod: biologick\u00E9 prepar\u00E1ty mohou b\u00FDt mikroskopov\u00E1ny v p\u0159irozen\u00E9m prost\u0159ed\u00ED nedoch\u00E1z\u00ED p\u0159i n\u00ED k denaturaci antigen\u016F a enzym\u016F imobilizace nast\u00E1v\u00E1 ve zlomku sekundy - mo\u017Enost sledovat dynamick\u00E9 d\u011Bje.V\u011Bt\u0161ina organism\u016F obsahuje v\u00EDce ne\u017E 70 procent vody, proto je pot\u0159eba p\u0159i mrazov\u00E9 fixaci po\u010D\u00EDtat s n\u011Bkter\u00FDmi anom\u00E1ln\u00EDmi vlastnostmi t\u00E9to kapaliny, kter\u00E9 jsou d\u00E1ny vod\u00EDkov\u00FDmi m\u016Fstky a van der Waalsov\u00FDmi silami a kter\u00E9 de facto mohou znamenat potrh\u00E1n\u00ED bun\u011Bk p\u0159i zv\u011Bt\u0161uj\u00EDc\u00EDm se objemu \u010Di rostouc\u00EDmi krystaly: hustota vody je nejvy\u0161\u0161\u00ED p\u0159i teplot\u011B 277 K tj. v kapaln\u00E9m stavu, nikoliv tedy v bod\u011B tuhnut\u00ED voda m\u00E1 vysok\u00FD bod t\u00E1n\u00ED (273 K), bod varu (373 K) a kritickou teplotu (647 K) objem vody v pevn\u00E9m skupenstv\u00ED je cca o 10 procent v\u011Bt\u0161\u00ED ne\u017E v kapaln\u00E9m stavu jej\u00ED vypa\u0159ovac\u00ED teplo je vysok\u00E9 m\u00E1 vysokou dielektrickou konstantu, s \u010D\u00EDm\u017E souvis\u00ED dobr\u00E9 rozpou\u0161t\u011Bc\u00ED schopnosti je zn\u00E1mo n\u011Bkolik krystalick\u00FDch forem leduVoda m\u016F\u017Ee mrznout procesem:homogenn\u00ED nukleace - p\u0159i jist\u00E9 teplot\u011B se v ultra\u010Dist\u00E9 vod\u011B za\u010Dnou n\u00E1hodn\u011B tvo\u0159it krystaliza\u010Dn\u00ED z\u00E1rodky. Lze ji p\u0159i standardn\u00EDch podm\u00EDnk\u00E1ch podchladit a\u017E k teplot\u011B 235 K. S procesem krystalizace je spojeno uvoln\u011Bn\u00ED tepla, kter\u00E9 oh\u0159\u00EDv\u00E1 cel\u00FD syst\u00E9m a udr\u017Euje jej v oblasti r\u016Fstu krystal\u016F. R\u016Fst krystal\u016F pokra\u010Duje a\u017E do dosa\u017Een\u00ED rekrystaliza\u010Dn\u00ED teploty zhruba p\u0159i 138 K a pokud teplo uvol\u0148ovan\u00E9 krystalizac\u00ED nen\u00ED dostate\u010Dn\u011B rychle odv\u00E1d\u011Bno, jsou vytvo\u0159en\u00E9 krystaly relativn\u011B velk\u00E9. heterogenn\u00ED nukleace - u norm\u00E1ln\u00ED vody p\u016Fsob\u00ED v roli krystaliza\u010Dn\u00EDch z\u00E1rodk\u016F nerozpustn\u00E9 \u010D\u00E1stice.V praxi u biologick\u00FDch vzork\u016F je situace krapet jin\u00E1, proto\u017Ee bu\u0148ky jsou slo\u017Eeny z mnoha heterogenn\u00EDch organel s odli\u0161n\u00FDm slo\u017Een\u00EDm (an)organick\u00FDch vodn\u00FDch roztok\u016F. Empiricky vych\u00E1z\u00ED, \u017Ee bu\u0148ka s cca 80 % vody zamrz\u00E1 p\u0159i teplot\u011B 233 K a jej\u00ED rekrystaliza\u010Dn\u00ED teplota je cca 188 K, ergo se v\u00FDrazn\u011B zkr\u00E1t\u00ED teplotn\u00ED interval, p\u0159i n\u011Bm\u017E mohou r\u016Fst krystaly.Proces krystalizace je spojen s f\u00E1zovou separaci, p\u0159i n\u00ED\u017E rostouc\u00ED krystalky ledu kumuluj\u00ED vodu z nezamrzl\u00FDch oblast\u00ED, a t\u00EDm p\u00E1dem roste koncentrace iont\u016F v okoln\u00EDm roztok\u016F, m\u011Bn\u00ED se osmotick\u00FD gradient a pH, co\u017E vede k redistribuci intra resp. extracelul\u00E1rn\u00EDch roztok\u016F a k po\u0161kozen\u00ED membr\u00E1n. Proces skon\u010D\u00ED v okam\u017Eiku dosa\u017Een\u00ED eutektick\u00E9 teploty a ztuhnut\u00EDm. Teplotn\u00ED interval r\u016Fstu krystal\u016F lze zkr\u00E1tit p\u0159i pou\u017Eit\u00ED kryoprotektantu. To je l\u00E1tka, kter\u00E1 sni\u017Euje teplotu homogenn\u00ED nukleace, zvy\u0161uje rekrystaliza\u010Dn\u00ED teplotu a sni\u017Euje mno\u017Estv\u00ED voln\u00E9 vody v syst\u00E9mu. D\u011Bl\u00ED se do dvou skupin: penetruj\u00EDc\u00ED - pronikaj\u00ED do bu\u0148ky a jej\u00EDch organel. Nap\u0159. glycerol, ethylenglykolnepenetruj\u00EDc\u00ED - z\u016Fst\u00E1vaj\u00ED vn\u011B bu\u0148ky. Nap\u0159. polyvinylpyrrolidon, sachar\u00F3za"@cs . . . . . . "Mrazov\u00E1 fixace"@cs . . . . . . . . . . "3461"^^ . . . . . . "26"^^ . . "15100646"^^ . . . . "Mrazov\u00E1 fixace, t\u00E9\u017E kryofixace je proces, jeho\u017E c\u00EDlem je dos\u00E1hnout vitrifikovan\u00E9ho stavu vzorku (\u201Ezesklen\u011Bn\u00ED\u201C), kdy je prepar\u00E1t ochlazen pod rekrystaliza\u010Dn\u00ED teplotu bez vzniku krystal\u016F. Z\u00E1kladn\u00EDm podm\u00EDnkou pro minimalizaci \u0161kod p\u0159i mrazen\u00ED prepar\u00E1tu je dosa\u017Een\u00ED vysok\u00E9 chladic\u00ED rychlosti."@cs . . . . "Mrazov\u00E1 fixace"@cs . . . . .