V soubojích 33. ročníku druhé nejvyšší fotbalové soutěže – 2. československé fotbalové ligy 1964/65 – se utkalo 42 mužstev ve třech skupinách po 14 účastnících každý s každým dvoukolovým systémem podzim–jaro. Tento ročník začal v pátek 14. srpna 1964 v Brně zápasem mezi domácím ZKL a Dynamem Kutná Hora (domácí zvítězili 2:0) a skončil v neděli 27. června 1965. Po sezoně došlo k reorganizaci nižších soutěží, druhá liga byla zúžena na dvě skupiny.