V soubojích desátého ročníku Moravskoslezské fotbalové ligy 2000/01 se utkalo 16 týmů každý s každým dvoukolovým systémem podzim–jaro. Tento ročník začal v sobotu 29. července 2000 a skončil v sobotu 16. června 2001.Do II. ligy postoupil vítěz, sestoupila poslední tři mužstva.